polyplus轉(zhuǎn)染試劑INTERFERin®的應(yīng)用

polyplus轉(zhuǎn)染試劑INTERFERin®在1nM siRNA下已經(jīng)提供了非常高的沉默效率，并且可以用于多種粘附細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。使用低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng)，其溫和的作用模式確保了更可靠的數(shù)據(jù)和優(yōu)異的細(xì)胞活力。由于與血清和抗生素的兼容性，INTERFERin®易于使用，也非常適合轉(zhuǎn)染miRNA和其他寡核苷酸，如pre-miRNA、mimic miRNA等。

polyplus轉(zhuǎn)染試劑INTERFERin®應(yīng)用方向廣泛，主要在以下幾個方面：

一、RNA干擾機(jī)制研究

RNA干擾是由細(xì)胞質(zhì)中的RNA分子介導(dǎo)的，也稱為siRNA，意思是“小干擾RNA"。這些siRNA寡核苷酸長21至25個堿基對，其序列與信使RNA（mRNA）特異性互補(bǔ)。siRNA募集RISC復(fù)合物（“RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物"）與其靶mRNA結(jié)合，以切割其，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)表達(dá)的沉默（圖1）。

圖1：細(xì)胞中的RNA沉默機(jī)制。

二、基因沉默實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行動手實(shí)驗(yàn)之前，siRNA必須根據(jù)研究目標(biāo)進(jìn)行設(shè)計(jì)，并由專門的供應(yīng)商合成。然后是siRNA轉(zhuǎn)染步驟本身，然后是基因沉

默和/或表型測定的測量。

將siRNA引入細(xì)胞會產(chǎn)生一些副作用。這些脫靶效應(yīng)是通過識別誘導(dǎo)翻譯抑制和/或mRNA降解的3'UTR序列產(chǎn)生的，或者通過識

別靶基因以外的mRNA產(chǎn)生的，這兩者都會導(dǎo)致細(xì)胞中的非特異性沉默。

為了避免脫靶效應(yīng)，siRNA必須設(shè)計(jì)有幾種算法，以確保精確調(diào)整靶向。此外，可以通過使用盡可能低的siRNA濃度來避免非特

異性相互作用。

在分析結(jié)果時，確保知道感興趣的蛋白質(zhì)和mRNA的半衰期，并在轉(zhuǎn)染后24至96小時測量相應(yīng)的基因沉默。理想情況下，基因

沉默應(yīng)該在mRNA和蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行評估。

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