如何提高電轉(zhuǎn)效率？

電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA 、mRNA等）導入真核細胞內(nèi)，來改變細胞的特性，從而達到改造細胞的目的，是實現(xiàn)細胞基因功能和蛋白質(zhì)表達研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢？讓我們一起來看看吧！

一、細胞收集時：

1)在消化貼壁細胞時，一定要注意終止胰酶反應，防止過度消化；最好使用專業(yè)的胰酶中和劑；

2)在進行細胞離心時，使用低轉(zhuǎn)速長時間離心，提升細胞的存活率；

3)選擇合適狀態(tài)的細胞，一般原代細胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數(shù)少的細胞，如果是凍存細胞，建議復蘇1-2h后使用；

4)選擇對數(shù)增長期的細胞；

5)做好支原體清除。

二、試劑添加：

1）電轉(zhuǎn)試劑的添加只需室溫操作即可；

2）細胞在試劑中停留不超20min，混合好盡快開始實驗；

3）轉(zhuǎn)染的底物占比不能大于總體積的10%，比如轉(zhuǎn)染體系100ul，底物最多添加10ul；

4）在消化的細胞進行配置時，一定要離心并完quan去除殘留培養(yǎng)基；

5）在加入到電極杯中時，要避免產(chǎn)生氣泡，從而影響電脈沖；

6）對底物進行內(nèi)毒素控制；

7）轉(zhuǎn)染試劑與底物濃度配比控制；

8）如果是mRNA轉(zhuǎn)染，可多洗滌2次。

三、程序設(shè)置：

1）使用電轉(zhuǎn)儀，程序已經(jīng)設(shè)定好，可以根據(jù)不同的細胞名稱，選擇對應的最you程序；根據(jù)實際情況，可以對程序進行微調(diào)，確保轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率。

2）使用需要自行設(shè)置的儀器，一般電場強度設(shè)置遵循低電場、長時程的原則。

四、細胞重懸：

1）轉(zhuǎn)染結(jié)束之后，可以先停留10min再加培養(yǎng)基重懸；

2）使用無鈣培養(yǎng)基重懸，5-10min后轉(zhuǎn)移細胞到培養(yǎng)皿上；

3）后續(xù)的實驗一般在轉(zhuǎn)染后24h再進行；

4）電轉(zhuǎn)后的細胞，鋪板數(shù)量翻一倍。

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