細胞轉染過程中需要注意什么？

隨著基因和蛋白功能的深入研究，轉染已經(jīng)成為科研實驗中最chang用的技術手段之一。那么在細胞轉染過程中需要注意什么呢？讓我們一起來看看吧！

一、轉染試劑

不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。

每種轉染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇最shi合實驗設計的轉染試劑。

不同轉染試劑有不同的轉染方法，但大多大同小異。轉染時應跟據(jù)具體轉染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質不同，質粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉染效果可能不同，應根據(jù)實驗室的具體條件來確定最佳轉染條件。

二、細胞狀態(tài)和密度

轉染前細胞的狀態(tài)和密度都非常影響轉染效率和后期的實驗結果。最shi合轉染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到指數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，最容易轉染。

細胞狀態(tài)不好，會導致轉染效率低下，為確保良好的細胞狀態(tài)需注意以下幾點：

1.選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細胞進行轉染。

2.細胞密度（%匯合度）達到60%-80%時，再進行轉染，此時轉染效率較高。切勿讓細胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。

3.同時注意在轉染后收細胞時的密度不要過爆。因為細胞長的過爆嚴重影響細胞的狀態(tài)（周期進程阻滯，凋亡增加等）從而影響實驗結果。一般為前一天下午鋪板，第二天上午進行轉染，48小時候收細胞進行功能檢測。

三、使用優(yōu)質DNA

DNA的質量影響轉染效率：

1.脂質體轉染基于電荷吸引原理，如果DNA的純度差，則其攜帶的少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉染復合物的有效形成及轉染的效率。

2.含有內毒素的質粒對細胞有很大的毒性作用。

3.為實現(xiàn)高效率、低毒性的轉染，應使用高質量的DNA（高純度、無菌、無內毒素）。

4.使用無內毒素的試劑盒和實驗方案制備DNA；

5.通過測量OD值來確定DNA純度和濃度，OD 260/280 值應介于1.7-1.9之間，越接近1.8越好。讀數(shù)小于1.8，表明樣品可能被芳香族產物（即苯酚）或蛋白質污染；讀數(shù)大于2.0，則表明樣品被RNA污染。

6.當轉染的DNA會編碼對細胞有毒害作用的產物時，可使用弱啟動子或可誘導的啟動子限zhi毒性基因產物表達對細胞造成的損害。

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