天根BL21(DE3)感受態細胞(CB105-02)現貨供應

該感受態細胞用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7 噬菌體 RNA 聚合酶基因的表達受控于λ噬菌體DE3區的lacUV5啟動子，該區整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達。轉化效率可達 107 cfu/µg。

本公司生產的BL21(DE3)感受態細胞是采用大腸桿菌BL21(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達10’cfu/ug，-90~-65℃保存幾個月轉化效率不發生改變。

操作方法：

1.取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

注意:一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 ，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。

2.向感受態細胞懸液中加入目的DNA(100μl的感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)，輕彈混勻，在冰浴中靜置30 min。

3.將離心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3 min，該過程不要搖動離心管。

注意:此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置5-8 min左右:如果室溫較低，可延長時間至8-15 min左右。條件允許建議使用42℃℃熱激方法。

4.向每個離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床振蕩培養45 min(150 rpm)，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5.將離心管內容物混勻，吸取100 μl已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37C培養12-16 h。

注意:涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產物涂布平板;反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300μI轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4°C保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板)

注意事項：

1.感受態細胞應保存在-90~-65℃，不可凍融和放置時間過長，以避免降低感受態細胞的轉化效率。

2.進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

3.為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到zui低。

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