植物組織蛋白質(zhì)提取方法

方法一：

1. 1. 根據(jù)樣品重量（1g 樣品加入3.5ml 提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。

2. 2. 樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4 小時(shí)）。

3. 3. 用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4. 4. 提取上清夜，樣品制備完成。

5. 5. 蛋白質(zhì)提取液：300ml

6. 1Mtris-HCl（PH8） 45ml

7. 甘油（Glycerol）75ml

8. 聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g

9. 這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！

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方法二：

1. 用三氯醋酸—丙酮沉淀法，這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！

2. 1. 在液氮中研磨葉片

3. 2. 加入樣品體積3 倍的提取液在-20℃的條件下過(guò)夜，然后離心（4℃8000rpm以上1 小時(shí)）棄上清。

4. 3. 加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1 小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。

5. 4. 上樣前加入裂解液，室溫放置30 分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm 以上1 小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒(méi)有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。

6. 5. 用Brandford 法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃備用。

7. 提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮

8. 裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。

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