Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，也稱為Transwell遷移或侵襲測(cè)定實(shí)驗(yàn)，是一種用于細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，用于研究細(xì)胞通過多孔膜的運(yùn)動(dòng)。前面已經(jīng)講過實(shí)驗(yàn)步驟，那實(shí)驗(yàn)過程中需要注意些什么呢？

注意事項(xiàng)一

 基質(zhì)膠在室溫下容易凝固，鋪膠過程全程需要在冰上操作。

注意事項(xiàng)二

 基質(zhì)膠濃度也是影響細(xì)胞遷移和侵襲的因素之一，所以基質(zhì)膠的濃度和稀釋比例需根據(jù)供應(yīng)商提供的信息和實(shí)驗(yàn)具體情況調(diào)整，必要時(shí)可設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳濃度和稀釋比例。一般常用濃度為1mg/mL。

注意事項(xiàng)三

  鋪膠時(shí)，盡量垂直小室底部在小室底部中間加入，可避免氣泡的產(chǎn)生。

注意事項(xiàng)四

  吸出小室內(nèi)未結(jié)合的基質(zhì)膠時(shí)需確保移液管的尖頭不會(huì)刮傷凝膠層表面。

注意事項(xiàng)五

 不同細(xì)胞的遷移和侵襲能力不同，可設(shè)置一系列細(xì)胞密度梯度摸索合適的細(xì)胞接種密度。

注意事項(xiàng)六

  小室的放置過程經(jīng)常有氣泡產(chǎn)生，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失，因此需特別留心。一旦出現(xiàn)氣泡，需將小室提起或用槍頭去除，去除氣泡后重新放置。

注意事項(xiàng)七

  接種細(xì)胞1-2小時(shí)后，可對(duì)培養(yǎng)板進(jìn)行檢查，確保沒有大氣泡產(chǎn)生。但有時(shí)會(huì)觀察到有極小的汽包產(chǎn)生，但并不影響細(xì)胞遷移和侵襲，也可輕輕敲擊孔板去除。

注意事項(xiàng)八 

  用PBS清洗小室時(shí)，需避物理觸碰小室底部。可以準(zhǔn)備幾個(gè)無菌燒杯或培養(yǎng)皿，倒入適量PBS，依次涮洗，可提高效率。

注意事項(xiàng)九

  拍照前需適當(dāng)晾干小室，水分會(huì)影響鏡下視野。

小tips：

實(shí)驗(yàn)中會(huì)用到的PBS推薦

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