怎樣純化抗體才能提高特異性？

一、抗體純化

為了提高特異性結合目標抗原的免疫球蛋白濃度，抗血清、腹水或細胞上清需要進一步純化以去除非目標抗原免疫球蛋白和其它血清蛋白。無論是多克隆抗體還是單克隆抗體，純化方法的選擇至關重要，其中單克隆抗體需要根據(jù)抗體亞型來選擇合適的親和介質或沉淀方法。多克隆抗體 一般選擇用抗原蛋白偶聯(lián)親和柱進行特異性抗體收集。

二、怎樣純化抗體才能提高特異性？

目前常用的親和純化方式主要是抗原親和純化和 Protein A 或 G 純化。

1.抗原親和純化

抗原親和純化是基于抗原 - 抗體可逆結合的特性產(chǎn)生的一種純化免疫球蛋白的方法，通過交聯(lián)到樹脂上的抗原，純化出與抗原有特異性反應的抗體，這一純化方法大量的去除了非特異性的免疫球蛋白成分，得到的抗體特異性更高。

2.Protein A 或 G 純化

Protein A 或 G 純化是利用金黃色葡萄球菌的蛋白 A(Protein A) 或鏈球菌的蛋白 G(Protein G)  對免疫球蛋白 Fc 段的高親和性，從抗血清中去除血清蛋白，這一方法無法去除非特異性免疫球蛋白。

3.兩種方式區(qū)別

用 Protein A 或 G 純化的多抗通常會有交叉反應，在實驗中可能產(chǎn)生背景、雜信號甚至假陽性。

采用抗原親和純化，雖然得率較 Protein A 或 G 純化的低，但抗體特異性得到很大提高。

單克隆抗體大部分采用 Protein A 或 G 的純化方法，因為小鼠腹水成分比抗血清簡單且雜抗體含量比例小，采用這一方法得到的單抗?jié)舛雀咔姨禺愋圆皇芨蓴_。

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