密理博PVDF膜一文Get

前言：WB實驗中的轉(zhuǎn)膜，顧名思義，是將電泳后分離的蛋白質(zhì)從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相載體上，同時維持其相對位置和分辨率的過程。需要根據(jù)雜方案和被轉(zhuǎn)移蛋白的特性.以及蛋白分子量大小等條件去選擇合適材質(zhì)、孔徑的雜交膜。

一、膜材質(zhì)的選擇

Western Blot實驗中zui常用的轉(zhuǎn)印膜有兩種：PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和NC膜（硝酸纖維素膜）。

1. NC膜

NC膜背景很低，可結(jié)合蛋白質(zhì)和核酸進(jìn)行各種印跡應(yīng)用。可適用于蛋白質(zhì)印跡法、RNA印跡法、DNA印跡法和斑點雜交技術(shù)。但缺點是對于分子量較小的蛋白質(zhì)會在洗滌時丟失，且NC膜韌性較差，操作時容易碎，對操作的技巧要求較高；

2. PVDF膜

PVDF膜在機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都具有更good的性能，且靈敏度高、分辨率和蛋白親和力較其他的膜要高，非常適合分子量較小的蛋白質(zhì)檢測，通常需要甲醇/乙醇預(yù)先活化。現(xiàn)在有新出的免甲醇潤濕的PVDF膜，可以免去甲醇對實驗操作人員的傷害。

3.根據(jù)膜材質(zhì)的特性選擇轉(zhuǎn)印膜，涉及以下幾方面的考慮：

蛋白結(jié)合能力

是否需要用醇預(yù)濕

開展多次剝離（stripping）和再次檢測（reprobing）實驗的能力

蛋白觀察

長期印跡保存

信噪比

可以看出常規(guī)PVDF膜相對NC膜優(yōu)點更多，實用性廣。

PVDF膜可提供更好的蛋白截留率、物理強(qiáng)度和廣泛的化學(xué)兼容性。其中更高的機(jī)械強(qiáng)度和出色的耐化學(xué)性使PVDF膜成為免疫檢測中各種染色應(yīng)用和多次檢測的理想選擇。使用PVDF膜的另一個優(yōu)點是，從單塊凝膠上轉(zhuǎn)移的平行重復(fù)泳道可用于后續(xù)各種應(yīng)用，如考馬斯亮藍(lán)染色，接著切割條帶進(jìn)行N端測序，蛋白水解/肽段分離/內(nèi)部測序，以及免疫檢測。

二、選擇膜孔徑

選到合適材質(zhì)的膜之后，還需要根據(jù)檢測蛋白的大小，選擇合適的膜孔徑。Western Blot轉(zhuǎn)印膜通常有兩種孔徑大小：0.2μm和0.45μm。

推薦產(chǎn)品：

1. Immobilon®-P 0.45umzui chang用的WB轉(zhuǎn)印膜，適用于一般的免疫印

跡應(yīng)用。（貨號：IPVH00010）

0.45μm：更加常用，適合大于20kD的蛋白，背景較低

2.Immobilon®-PSQ 0.2um小分子蛋白/肽WB轉(zhuǎn)印膜（貨號：ISEQ00010）

適用于蛋白測序和低分子量蛋白的免疫印跡。它有著更高的蛋白結(jié)合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。0.2μm ：特別適合小于20kD的蛋白；推薦用于低豐度蛋白檢測。結(jié)合能力是由孔的內(nèi)部表面積來決定的（文獻(xiàn)參考：Mansfield，1994）。0.2μm轉(zhuǎn)印膜的內(nèi)部表面積大約是0.45μm轉(zhuǎn)印膜的三倍，使其吸附能力更高

三、選擇合適的轉(zhuǎn)印膜形式

• 卷膜

• 預(yù)切膜

預(yù)切好的膜與所有預(yù)制膠以及大部分市售的凝膠電泳系統(tǒng)兼容。

對于用量較小的情況，優(yōu)先推薦選擇預(yù)裁切的包裝產(chǎn)品，使用比較便捷也可以避免浪費。對于用量較大的情況，推薦使用整卷產(chǎn)品。預(yù)裁切產(chǎn)品無需再進(jìn)行裁切，使用非常便捷；并且由于機(jī)械化裁切的效率很高，可以避免手工裁切導(dǎo)致的膜裁切時的浪費。

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