CCK8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

Cell Counting Kit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

基本原理：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liu酸2甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

用途：藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)。

1、當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。

2、酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

3、CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。

4、CCK-8在0~5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年。

5、當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。

6、在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。

7、金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)100%抑制。

8、懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。

天津益元利康生物科技有限公司

一、輻射五大服務(wù)方向：

  1.國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理；

  2.國(guó)外試劑訂購(gòu)（直訂，或境外代理）；

  3.基因組測(cè)序（二代，二代+三代）；

  4.基因分型（SNP檢測(cè)）：低/中/中 高通量項(xiàng)目；

  5.生物樣本運(yùn)輸（國(guó)內(nèi)、）；

二、多家代理品牌，涉及30多種較有名品牌，經(jīng)營(yíng)代理500多個(gè)品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

  所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷門品牌，均能給客戶購(gòu)買到。價(jià)格優(yōu)，貨期短，可加急，快10天到貨；保證服務(wù)質(zhì)量，所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，

  公司自成立依靠過(guò)硬的服務(wù)和良好的信譽(yù)與各大企事業(yè)單位、科研單位建立長(zhǎng)期合作。客戶包括北大，清華，地大，中科院各所，各大藥企等等。

  專業(yè)訂購(gòu)國(guó)內(nèi)外試劑耗材，常備現(xiàn)貨，一手貨源，歡迎合作。