polysciences24765說(shuō)明書(shū)

規(guī)格:

100mg，1 g,  1 ml

貯存條件:

避光，-20度

CAS號(hào):

PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)   CAS Number: 49553-93-7
MaxFect Transfection Regent       CAS Number: 49553-93-7       
 

物理性狀:

固體為白色或近白色粉末。 1 mg/mL水溶液透明，接近無(wú)色或略顯黃色。

用途:

細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于臨床治療。

PEI MW25000和PEI Max MW40000區(qū)別：

PEI MAX MW40000 ( Polysciences#24765-1)是線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI MW25000(Polysciences#23966-1)的升級(jí)產(chǎn)品，是一種功能更為強(qiáng)大的高效瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。PEI MAX MW40000與PEI 25000的區(qū)別在于：
1）wanquan水解（去乙酰化）
2）PEI 25000的鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性
3）含更長(zhǎng)連續(xù)性乙烯亞胺片段，其轉(zhuǎn)染效率比PEI MW25000提高11%以上。

4）PEI MAX 40K比PEI 25K更易于使用，并且更高效。PEI 25K轉(zhuǎn)染溶液通常需要幾個(gè)小時(shí)才能制備，而PEI MAX 40K可以在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)化為即用型可溶性溶液。
5）PEI 25K含有4-11%的殘余丙酰基，可防止聚合物主鏈與DNA強(qiáng)烈結(jié)合。PEI MAX 40K去乙酰化的結(jié)構(gòu)意味著每批產(chǎn)品的表現(xiàn)始終如一，穩(wěn)定性更強(qiáng)。

儲(chǔ)存濃度:

1 mg/ml

工作濃度:

3 ug/ml 左右，每ml培養(yǎng)基加入3 ul儲(chǔ)存液。

PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法：

1. 稱(chēng)取100mg PEI轉(zhuǎn)染試劑，溶解于100ml無(wú)菌水中。配置的終濃度是1 mg/ml.
2. 緩慢使用稀鹽酸，調(diào)節(jié)PH至7.0，一定不要讓pH過(guò)了，一旦過(guò)了效果就不好了。
3. 使用0.1um或者0.22um無(wú)菌過(guò)濾器，過(guò)濾除菌。
4. 分裝成每管500ul-1ml，-20度，保存，備用。
5. 使用超純水配置，器具一定要滅菌干凈，防止支原體污染。
 

適用范圍:

本產(chǎn)品適用于絕大多數(shù)真核細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：HEK 293，293T，A549，B16F10，HeLa，Hepa 1-6，Hepa-1c1c7，HepG2，BHK-21，C2C12，C6，CHO-K1，COS-1，COS-7，Daoy，DU 145，K562，KB，LL/2(LLC1)， LNCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR-3，PC-3，PC-12等。

細(xì)胞培養(yǎng)基:

PEI轉(zhuǎn)染試劑適用于大多數(shù)常用細(xì)胞培養(yǎng)基，且轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)基，血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率。
 

轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度：

一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60% - 80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率。然而，不同細(xì)胞的最適轉(zhuǎn)染密度都不盡相同。因此在初次轉(zhuǎn)染某種細(xì)胞時(shí)，可以通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)先確認(rèn)該細(xì)胞最佳的轉(zhuǎn)染密度。

轉(zhuǎn)染質(zhì)粒純度和濃度：

用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染的DNA應(yīng)具有較高的純度，且無(wú)內(nèi)毒素殘留(推薦使用無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒抽提)。質(zhì)粒濃度盡量高一些，建議大于500 ng/ul.

轉(zhuǎn)染比例：

DNA：PEI = 1:3
1ml細(xì)胞培養(yǎng)液，建議使用1 ug-3 ug DNA 和3 ul - 9 ul PEI轉(zhuǎn)染試劑儲(chǔ)存液。具體根據(jù)細(xì)胞情況自由調(diào)整。

在初次轉(zhuǎn)染某種細(xì)胞時(shí)，推薦PEI和DNA的比例為2:1，即1 μg DNA使用2 μl PEI。轉(zhuǎn)染1 μg DNA所使用的PEI轉(zhuǎn)染試劑劑量可以在1 - 5 μl之間進(jìn)行調(diào)整以獲得最佳的轉(zhuǎn)染效率。
 

轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間:

對(duì)于絕大多數(shù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)而言培養(yǎng)24 - 48 h即可，如實(shí)驗(yàn)情況特殊可在12 - 72 h之間進(jìn)行優(yōu)化。