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      當前位置:首頁技術文章超濾離心管使用方法

      超濾離心管使用方法

      更新時間:2025-08-12點擊次數:1081

      超濾離心管操作指南:3大誤區毀樣本|附分子截留/離心參數對照表

      超濾回收率<50%?本文詳解Millipore/Amicon超濾管選型技巧、離心程序、防堵膜策略,提供蛋白濃縮/緩沖液置換/脫鹽全方案!附轉速-分子量計算公式+堵膜急救方案。

      一、超濾管選型黃金法則(立即避坑)

      需求

      膜材質

      截留分子量

      代表產品

      蛋白濃縮

      再生纖維素

      10kDa

      Amicon® Ultra-4

      病毒純化

      PES

      100kDa

      Millipore UFC9100

      核酸回收

      低吸附PVDF

      30kDa

      Vivaspin® 20

      內毒素去除

      超低吸附

      3kDa

      Amicon® Ultra-15

      >??選錯致命傷:截留分子量>目標物樣本穿透丟失!

      二、操作流程(4步提升回收率至>90%

      Step1預處理(防膜失效關鍵!)

      1.離心管冰上預冷

      2.注入1ml預冷PBS

      3.1500g×5min(活化膜孔,去除甘油/乙醇)

      Step2樣本加載

      參數

      標準值

      避坑要點

      最大裝載量

      80%管容積

      防溢出污染

      樣本粘度

      50cP(過高需稀釋)

      粘度檢測方法:移液器吸打阻力

      保留液體積

      ≥50μl(防干膜)

      定時觀察液面

      Step3離心程序(轉速/時間公式)

      ?離心力計算公式:

      RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2

      r=離心半徑cm

      分子量-離心參數表:

      截留分子量

      推薦離心力

      時長

      3kDa

      4000g

      20-30min

      10kDa

      3500g

      15-25min

      50kDa

      3000g

      10-15min

      >??防過熱技巧:4℃離心+10min暫停降溫

      Step4樣本回收

      -正置法:直接吸取濃縮液(回收率80-90%

      -倒置法(高價值樣本):

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      三、3大高頻問題急救方案

      問題1:膜堵塞(流速驟降)

      -處理步驟:

      1.0.1MNaOH反向沖洗10min

      2.超純水沖洗3

      3.500g×5min低速離心疏通

       問題2:回收率低

      -根因排查:

      現象

      原因

      對策

      濾液渾濁

      膜破裂

      更換新管(勿超速)

      管壁掛液明顯

      疏水吸附

      預處理加 0.01% Tween-20

       

      問題3:濃縮倍數不足

      -科學濃縮比計算:

      ```

      濃縮倍數=初始體積/終體積

      (推薦≤10倍,防蛋白沉淀)

      ```

      -高倍濃縮技巧:分次添加樣本(維持液面高度)

      四、不同應用場景參數優化


      實驗目標

      關鍵參數調整

      回收率

      蛋白濃縮

      4℃ + 3500g × 15min

      92%

      緩沖液置換

      預裝新緩沖液 ×3

      99%

      脫鹽

      超純水稀釋 ×5

      98%

      外泌體純化

      100kDa + 3000g ×30min

      80%




      五、產品推薦

      密理博millipore超濾離心管——天津益元利康生物科技有限公司,歡迎咨詢。

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