美天旎磁珠分選核心步驟

美天旎的磁珠分選技術非常成熟和高效。其核心步驟標準化程度高，主要分為陽性分選和陰性分選。以下為您詳細解析 MACS® 技術操作步驟，以從單個細胞懸液中陽性分選特定細胞類型為例。整個過程快速、溫和，通常在1-2小時內即可完成。

一、美天旎磁珠分選第一步：實驗前準備

1.  樣本：制備好高質量的單細胞懸液（如從血液、脾臟、腫瘤組織中獲取，并經細胞篩過濾去除團塊）。

2.  試劑：

       美天旎磁珠：針對您目標細胞表面標志物的熒光抗體-磁珠復合物。

       MACS® 分選緩沖液：通常是含EDTA的PBS+胎牛血清。至關重要，用于洗滌、重懸和上樣。

       預冷的洗脫/收集管。

3.  儀器與耗材：

       MACS® 分選架 和 MACS® 分選柱（根據細胞數量選擇，如 LS柱 用于最多 2x10^9 總細胞，MS柱 用于最多 10^7 總細胞）。

       移液器、冰盒等。

二、美天旎磁珠分選第二步：細胞標記

1.  計數與離心：對單細胞懸液進行計數，然后離心（如300-400g，5分鐘）棄去上清。

2.  重懸：用適量預冷的MACS®緩沖液重懸細胞沉淀。建議用量：每10^7 個細胞使用80-100 μL緩沖液。

3.  加入磁珠：向細胞懸液中加入推薦量的美天旎磁珠（具體體積參考產品說明書）。

4.  混勻與孵育：輕輕吹打混勻，在2-8°C冰箱（或冰上）中避光孵育 15-20分鐘。

       關鍵點：低溫孵育可減少非特異性結合和細胞吞噬，保持細胞活性。

三、美天旎磁珠分選第三步：洗滌與重懸

1.  向試管中加入10-20倍標記體積的MACS®緩沖液。

2.  離心，棄去上清，以去除未結合的游離磁珠。

3.  用適量緩沖液重懸細胞。上樣體積取決于分選柱的容量（例如，對于LS柱，用500 μL至3 mL重懸）。

四、美天旎磁珠分選第四步：準備分選柱

1.  將MACS®分選柱固定在強磁場中。

2.  用緩沖液潤洗分選柱（例如，LS柱用3 mL緩沖液）。讓液體自然流盡，此步驟為分選柱“預濕"。

五、美天旎磁珠分選第五步：上樣與分選

1.  上樣：將細胞懸液小心地加到分選柱中。讓細胞懸液依靠重力自然流下。不要用活塞或助推器。

2.  收集流穿液：流下來的液體即為未標記的陰性細胞（非目標細胞），可用收集管接收。

3.  洗滌：待細胞懸液wanquan進入柱床后，分多次加入緩沖液洗滌（如LS柱：3次，每次3 mL）。收集所有的流穿液，這部分也是陰性細胞。

六、美天旎磁珠分選第六步：洗脫目標細胞

1.  將分選柱移出磁場，放在一個新的收集管上。

2.  加入適量的緩沖液（如LS柱用5 mL）。

3.  立即用柱塞 迅速、有力地將緩沖液推過分選柱。這一步是將被磁場吸附的磁性標記細胞（目標細胞） 沖洗下來。

4.  收集到的液體就是您需要的高純度目標細胞。

七、美天旎磁珠分選第七步：分析與后續使用

1.  可對分選得到的陽性細胞和陰性細胞進行細胞計數和活力檢測（如臺盼藍染色）。

2.  通過流式細胞術 檢測分選純度。

3.  細胞可直接用于下游實驗：如細胞培養、功能實驗、分子生物學分析或單細胞測序。

關鍵注意事項

1.  保持低溫：整個操作過程盡可能在2-8°C或冰上進行，以維持細胞活性和減少非特異性結合。

2.  避免氣泡：上樣和加緩沖液時，盡量避免產生氣泡，以免影響分選柱內的流體動力學。

3.  不要堵塞柱子：細胞懸液必須無團塊，否則會堵塞分選柱。

4.  選擇合適的柱子：根據起始細胞總數和目標細胞的預期頻率選擇合適型號的分選柱。寧大勿小。

5.  快速操作：洗脫步驟要迅速，一旦分選柱離開磁場，就應立即洗脫，防止磁珠標記的細胞因磁場消失而重新混入柱床。

6.  緩沖液：務必使用推薦的MACS®緩沖液，其他緩沖液中的Ca2+/Mg2+可能影響分選效果。

分選策略選擇

   陽性分選：直接、快速地獲取目標細胞。如上文所述。

   陰性分選：通過去除所有不想要的細胞，間接富集目標細胞。適用于目標細胞沒有特異性表面標志物，或標志物未知的情況，也適用于不希望抗體與細胞表面受體結合影響后續功能實驗的情況。

   去除死細胞：可以使用特定的死細胞去除試劑盒，在分選前先去除死細胞，能極大提高分選效率和純度。

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