基因組DNA提取常見問題

　　基因組DNA提取常見問題
 

　　你知道基因組DNA提取的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、DNA提取產量低？
 

　　(1)實驗材料量太少。適當增加材料用量。
 

　　(2)樣本裂解不充分。適當減少樣品量，用液氮或勻漿器對樣品進行研磨和勻漿，加入裂解液后使其和樣品充分混勻，適當延長裂解時間。
 

　　(3)提取材料質量不好。保證樣品本身DNA含量，盡量選用富含核酸的組織或新鮮組織提取基因組DNA，樣品采集后應盡快保存在-80℃或液氮中，避免樣品反復凍融或保存時間過久。若樣品DNA含量較少，即使電泳檢測不到明顯的DNA條帶，仍可嘗試進行PCR檢測，建議使用靈敏度高的酶進行擴增。
 

　　(4)DNA斷裂或降解。避免因移液槍反復吹吸或反復凍融樣品造成的DNA損傷，及避免在操作過程中帶入外源DNase污染。
 

　　(5)若采用試劑盒法(吸附柱法)提取基因組DNA，還有可能因為部分試劑未添加無水乙醇。使用前必須按規定量添加無水乙醇，溶液使用完后立即蓋緊蓋子。
 

　　二、提取的基因組DNA純度低，影響下游酶切、PCR等實驗？
 

　　(1)DNA中含有蛋白、多糖、多酚類雜質。重新純化DNA，去除殘留蛋白和糖酚。
 

　　(2)DNA在溶解前，有乙醇殘留抑制后續酶反應。重新沉淀DNA，充分揮發乙醇。
 

　　(3)DNA中有金屬離子殘留。增加70%乙醇洗滌次數。
 

　　三、試劑盒法(吸附柱法)提取基因組DNA
 

　　(1)DNA鹽濃度過高：在使用漂洗液進行清洗時，可沿吸附柱的管壁四周加入，且加入漂洗液后室溫靜置5min，有助于清洗掉吸附柱膜上殘留的鹽離子。
 

　　(2)洗脫的DNA中殘留乙醇：向吸附柱中加入洗脫液前，需室溫靜置2min，讓殘留的乙醇揮發后進行洗脫。
 

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