你知道PCR檢測(cè)技術(shù)的分類(lèi)嗎？

分子診斷技術(shù)是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學(xué)技術(shù)通過(guò)檢測(cè)基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，從而對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術(shù)。其基本原理是檢測(cè)DNA或RNA的結(jié)構(gòu)是否變化、量的多少及表達(dá)功能是否異常，以確定受檢者有無(wú)基因水平的異常變化，對(duì)疾病的預(yù)防、預(yù)測(cè)、診斷、治療具有重要意義。那么你知道PCR檢測(cè)技術(shù)的分類(lèi)嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

PCR技術(shù)是一種用于擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，基本原理是在反應(yīng)室中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復(fù)制條件，使目的DNA在細(xì)胞外完成擴(kuò)增的過(guò)程。是體外DNA擴(kuò)增技術(shù)之一，至今已經(jīng)超過(guò)30年的歷史。

在1983年，美國(guó)人Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(polymerase chain reaction, PCR),這一技術(shù)將DNA的變性原理以及復(fù)性原理加以利用，采用適溫延伸、高溫變性以及低溫復(fù)性，讓核酸片段實(shí)現(xiàn)了體外擴(kuò)增，可將極微量的目標(biāo)DNA特異地?cái)U(kuò)增上百萬(wàn)倍，從而提高對(duì)DNA分子的分析和檢測(cè)，因?yàn)镻CR有著很高的靈敏度以及特異性，而且簡(jiǎn)便快速，所以這種技術(shù)已經(jīng)成為目前臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室接受程度最高的技術(shù)。同時(shí)，PCR技術(shù)又可以分為定量PCR和常規(guī)PCR，定量PCR分為實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）和數(shù)字PCR。

一、普通PCR：

采用普通PCR 擴(kuò)增儀來(lái)對(duì)靶基因進(jìn)行擴(kuò)增，然后采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，只能做定性分析。

二、熒光定量PCR（RT-PCR）：

熒光定量PCR（Real-Time PCR），也叫做qPCR，通過(guò)在反應(yīng)體系中加入能夠指示反映進(jìn)程的熒光探針，通過(guò)熒光信號(hào)的積累來(lái)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的積累，通過(guò)熒光曲線(xiàn)來(lái)判斷結(jié)果，并可以借助Cq 值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)定量。

qPCR 技術(shù)由于操作過(guò)程在封閉體系中進(jìn)行，降低了污染概率，并且可以通過(guò)對(duì)熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)從而進(jìn)行定量檢測(cè)，因此臨床應(yīng)用最為廣泛，已成為PCR中的主導(dǎo)技術(shù)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為：TaqMan熒光探針、分子信標(biāo)和熒光染料。

三、數(shù)字PCR(dPCR)：

數(shù)字PCR（DigitalPCR, dPCR, Dig-PCR）通過(guò)終點(diǎn)檢測(cè)計(jì)算目標(biāo)序列的拷貝數(shù)，無(wú)需采用內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可進(jìn)行精確的絕對(duì)定量檢測(cè)。

數(shù)字PCR采用終點(diǎn)檢測(cè)，不依賴(lài)于Ct值（循環(huán)閾值），所以數(shù)字PCR反應(yīng)受擴(kuò)增效率的影響降低，對(duì)PCR反應(yīng)抑制物的耐受能力提高，具有很高的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性。

由于具備高靈敏度、高精確度的特點(diǎn)，不易被PCR反應(yīng)抑制劑干擾，無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品可實(shí)現(xiàn)真正意義的絕對(duì)定量，而成為研究和應(yīng)用熱點(diǎn)。

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