qPCR實(shí)驗(yàn)的Ct值有什么作用？

2023-09-18 qPCR擴(kuò)增過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)的所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴(kuò)增達(dá)到一定產(chǎn)物量時(shí)，所對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)。那么你知道qPCR實(shí)驗(yàn)中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來看看吧！一、指數(shù)擴(kuò)增、模板量與Ct值的關(guān)系理想情況下，qPCR中的基因經(jīng)過一定的循環(huán)數(shù)被指數(shù)擴(kuò)增而積累，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴(kuò)增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+En）循環(huán)個(gè)數(shù)。然而qPC...

病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)有何注意事項(xiàng)？

2023-09-14 病毒轉(zhuǎn)染是指將外源病毒導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)，用病毒將帶有目的基因的載體整合到細(xì)胞的基因組中，以達(dá)到長期穩(wěn)定表達(dá)目的基因的目的。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。那么病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來看看吧！一、病毒安全性問題病毒本身具有一定的危險(xiǎn)性，需要在符合生物安全實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并遵守相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)范。病毒操作時(shí)最好使用生物安全柜。如果使用普通超凈工作臺(tái)操作病毒，請(qǐng)不要打開排風(fēng)扇。病毒操作時(shí)...

如何提高電轉(zhuǎn)效率？

2023-09-14 電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞收集時(shí)：1)在消化貼壁細(xì)胞時(shí)，一定要注意終止胰酶反應(yīng)，防止過度消化；最好使用專業(yè)的胰酶中和劑；2)在進(jìn)行細(xì)胞離心時(shí)，使用低轉(zhuǎn)速長時(shí)間離心，提升細(xì)胞的存活率；3)選擇合適狀態(tài)的細(xì)胞，一般原代細(xì)胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數(shù)少...

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別是什么？

2023-09-13 細(xì)胞培養(yǎng)有兩種基本方式，一種是人工基質(zhì)上的單層細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)），另一種是在培養(yǎng)基中自由漂浮（懸浮培養(yǎng)）。那么你知道貼壁細(xì)胞培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別是什么嗎？讓我們一起來看看吧！來自脊椎動(dòng)物的大多數(shù)細(xì)胞，除了造血細(xì)胞系和少數(shù)其他細(xì)胞系，都是貼壁依賴性的，必須在經(jīng)過專門處理以允許細(xì)胞粘附和擴(kuò)散的合適基質(zhì)上培養(yǎng)。然而，許多細(xì)胞系也適用于懸浮培養(yǎng)。同樣，大多數(shù)市售昆蟲細(xì)胞系在貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)中生長良好。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞可以保存在未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中，但隨著培養(yǎng)體積與表面積的增加...

什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞生長曲線？

2023-09-13 你知道什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)，和細(xì)胞生長曲線嗎？，讓我們一起來看看吧！一、原代細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首ci培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離體時(shí)間短，遺傳性狀和體內(nèi)細(xì)胞相似，適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。最chang用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。二、細(xì)胞生長曲線細(xì)胞生長曲線是測定細(xì)...

熒光定量PCR的原理是什么？

2023-09-12 熒光定量PCR（Real-timePCR），是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！以探針法熒光定量PCR為例：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開始時(shí)，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測不到熒光信號(hào)...

細(xì)胞傳代的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？有何注意事項(xiàng)？

2023-09-12 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，去除原培養(yǎng)基并將細(xì)胞從原培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基中，維持細(xì)胞的活力與增殖。細(xì)胞傳代既可以擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)量，也能夠避免細(xì)胞因進(jìn)入平臺(tái)期而出現(xiàn)生長抑制甚至死亡的情況。那么你知道細(xì)胞傳代的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來看看吧！一、實(shí)驗(yàn)步驟1.貼壁細(xì)胞的傳代:1)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及密度，評(píng)估細(xì)胞的狀態(tài)，以作為傳代比例的參考。2)提前紫外殺菌（至少30min為宜）操作臺(tái)及實(shí)驗(yàn)材料。3)注意無菌操作，在操作臺(tái)中吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液（盡可能去...

如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)？

2023-09-11 在蛋白表達(dá)系統(tǒng)的相關(guān)研究中，從頭合成蛋白質(zhì)并不是一個(gè)可行的選擇。因此需要借助活細(xì)胞或細(xì)胞器用作生產(chǎn)和構(gòu)建蛋白質(zhì)的工廠。那么你知道該如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)嗎？讓我們一起來看看吧！目前，較為主流的表達(dá)宿主有大腸桿菌（E.coli）、畢赤酵母（P.pastoris）、昆蟲-桿狀病毒（Bac-to-Bac系統(tǒng)）以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞系（CHO、HEK293）等。一、細(xì)菌優(yōu)點(diǎn)：1.遺傳背景清楚；2.繁殖快、成本低、抗污染能力強(qiáng)；3.表達(dá)量高、表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡單、穩(wěn)定性好；4.商品化的載體...