蛋白芯片是什么？

2024-11-21 一、蛋白芯片簡介?蛋白芯片?是一種高通量的蛋白質功能分析檢測技術，主要用于監測蛋白質之間的相互作用。其基本原理是將各種蛋白質有序地固定于載體上，然后利用標記了特定熒光物質的抗體與芯片上的蛋白質結合，通過熒光強度分析蛋白質的表達數量和相互作用關系?。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通過將已知的蛋白質分子固定在固相載體上，然后捕獲與之特異性結合的待測蛋白質。這些待測蛋白質可能存在于血清、血漿、尿液等生物樣本中。通過洗滌和純化步驟后，利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術測定各點的熒光強度...

如何提取細胞核蛋白？

2024-11-20 本文介紹一下用勻漿器研磨法提取貼壁細胞核蛋白的具體操作。一、前期準備1、臺盼藍染液：取臺盼藍粉劑，將其溶解在10mL的雙蒸水當中配制成質量體積比為4%（4%w/v）的臺盼藍母液。在使用時，利用PBS緩沖液將母液稀釋10倍，使其濃度達到0.4%，之后再與細胞懸液混合均勻。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值為7.9）、1.5mmol/L的氯化鎂、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。若擔心漿蛋白降解會對核蛋白產生影響...

細胞凋亡的檢測

2024-11-19 一、光學顯微鏡觀察凋亡細胞的主要特征為核染色質致密深染，形成致密質塊，有時可碎裂。檢測方法：細胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態改變，結合顯微測量工具可作凋亡細胞計數。二、視頻時差顯微技術細胞培養中常用，通過相差顯微鏡可動態觀察細胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細胞表和外形的變化。檢測方法：收集2×10^5細胞/ml培養的細胞，置于多孔培養板，加入凋亡誘導劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態改變，每隔1分鐘作序列攝影...

PCR擴增反應中的嵌合體是什么？

2024-11-18 PCR實驗中產生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產生的呢？那又如何預防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴增反應中的嵌合體是指一個PCR產物來自兩個或多個模板分子，通常是由于延伸未完quan導致的?。這種現象通常發生在PCR反應中，特別是當使用多重PCR或復雜模板時。嵌合體會導致擴增產物中含有非預期的片段，有可能會影響實驗結果的準確性，甚至導致錯誤的解釋。二、形成原理在PCR反應中，DNA模板在...

流式細胞儀怎么分選T細胞?

2024-11-18 上文介紹了流式細胞術的原理及應用，今天讓我們學習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標記：根據抗體說明書標記實驗管。混勻后，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機檢測。二、儀...

流式細胞術原理及應用

2024-11-15 流式細胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細胞術實驗原理流式細胞術（FlowCytometry,FCM）是一種單細胞定量分析技術，該技術通過測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數，可以定量分析細胞的結構特征（如DNA含量、蛋白、細胞膜、胞漿或胞核抗原表達量）和功能特征（如細胞內酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數，進行細胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細胞分離并計數，將感興趣的細胞分選出來，提供分類比例并進行進一步分析。二、流式細胞技術應用1...

引物探針的使用方法有哪些？

2024-11-14 一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設計引物和探針?：首先需要根據目標DNA序列設計特異性引物和探針。引物的長度一般為20-25個核苷酸，探針的長度一般為15-25個核苷酸。設計時要注意避免非特異性擴增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測樣本中提取DNA，作為PCR反應的模板。確保模板DNA的質量和濃度，以獲得可靠的實驗結果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應體系?：根據實驗需求，配制含有引...

IHC出現假陽性、假陰性等問題該怎么辦?

2024-11-13 ?免疫組化（IHC）實驗中出現假陽性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽性的處理1.?降低一抗濃度?：通過降低一抗的濃度，可以減少非特異性結合，從而降低假陽性。通常，降低濃度至能看到陽性表達且能明顯區分陽性區域與周圍間質即可?。2.?調整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對于動物標本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應引...