如何選擇合適的流式抗體？

2024-01-05 由于在流式細胞實驗過程中，熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數據質量。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質及檢測效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。那么你知道我們該如何選擇合適的流式抗體嗎？讓我們一起來看看吧！流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。...

外泌體提取與純化常見方法

2024-01-05 外泌體是一種細胞分泌的微小膜泡，大小為30~150nm的磷脂雙分子結構，可在細胞間傳遞物質和信號。它在機體內廣泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、腦脊液等各種體液中。那么你知道外泌體提取與純化常見方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、差速離心法差速離心法是最常見的外泌體分離技術之一。這種方法利用外泌體與其他細胞器的沉降系數不同，將細胞、細胞碎片以及其他細胞器等，通過不同離心速度分離出去，從而得到純凈的外泌體。該方法的優點在于提取方法簡單，提取過程中不會引入其他的標記物，適合大...

質粒構建的過程有哪些？

2024-01-04 質粒構建是分子生物學研究中zui常用的實驗技術，原理依賴于限制性核酸內切酶，DNA連接酶和其他修飾酶的作用，分別對目的基因和載體DNA進行適當切割和修飾后，將二者連接在一起，再導入宿主細胞，實現目的基因在宿主細胞內的正確表達。那么你知道質粒構建的過程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、質粒載體制備質粒載體的制備既可以選擇單酶切也可以選擇雙酶切，一般推薦使用雙酶切。其實目的就只有一個，盡量使載體的末端具有特異性，防止自連。1）選擇質粒上兩個酶切位點的距離不應小于太?。?0bp），...

質粒構建的方法有哪些？

2024-01-04 細菌質粒是DNA重組技術中常用的載體。通過基因工程手段將需要的外源基因送進受體細胞中去進行增殖和表達。將某種目標基因片段重組到質粒中，構成重組基因或重組體。然后將這種重組體經微生物學的轉化技術，轉入受體細胞(如大腸桿菌)中，使重組體中的目標基因在受體菌中得以繁殖或表達，從而改變寄主細胞原有的性狀或產生新的物質。那么你知道質粒構建的方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、酶切連接傳統意義上，質粒重組是基于堿基互補配對的原理，一般做法為：1）通過引物在目的片段兩端引入酶切位點；2）...

細胞因子有哪幾類？

2024-01-03 細胞因子（cytokine）是由免疫細胞及組織細胞分泌的在細胞間發揮相互調控作用的一類小分子可溶性多肽蛋白，通過結合相應受體調節細胞生長分化和效應，調控免疫應答。在一定條件下也參與炎癥等多種疾病的發生。那么你知道細胞因子有哪幾類嗎？讓我們一起來看看吧！細胞因子種類繁多，已發現200余種人細胞因子，根據結構和功能可分為六大類。一、白細胞介素早期發現細胞因子是由白細胞產生又在白細胞間發揮調節作用，故命名為白細胞介素（IL）。按照其發現順序給予其IL序號（如IL-1、IL-2等）并...

細胞因子的特點有什么？

2024-01-03 細胞因子是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質。具有調節固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長、APSC多能細胞以及損傷組織修復等多種功能。那么你知道細胞因子的特點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、多效性一種細胞因子可以對不同的細胞發揮不同的作用，例如IL-4可以活化B細胞并促進B細胞的增殖和分化，也可以刺激胸腺細胞和肥大細胞增殖。二、重疊性兩...

如何使用PVDF膜？

2024-01-02 了解或者做過WesternBlot的同學都應該清楚，經過電泳分離后的蛋白質樣品需經過“轉膜”步驟，將蛋白從PAGE膠轉移到膜上進行固定后，才能進行后續各種方法的WesternBlot的檢測。WesternBlot中膜的選擇是實驗成功的關鍵點，實驗中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC)和PVDF膜，PVDF膜結合能力強且具有較強的機械強度，可以重復使用。那么你知道該如何使用PVDF膜嗎？讓我們一起來看看吧！一、何為PVDF膜？如何選擇PVDF膜?PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（poly...

WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區別是什么？

2024-01-02 查詢抗體的時候，發現在抗體應用欄中，有的抗體適用于WB、IP、IHC、IF、F、CHIP，而有的抗體適用于WB、IHC、IF、F，不適用于IP和CHIP。那么你知道WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區別是什么？讓我們一起來看看吧！一、WB蛋白質印跡是生命科學實驗中一項常見的分子生物學實驗技術，原理為利用電泳（SDS-PAGE）分離蛋白質，接著將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法，通過分析條帶大小和顯色信號獲得目標蛋白質在所分析的細胞或組織樣本表達情況...