常見的DNA純化方法

2023-10-10 在分子生物學實驗中，提純DNA樣本是十分常見的步驟，下面給大家介紹幾種常見的DNA純化方法，一起來看看吧！一、苯酚-氯仿抽提法苯酚和氯仿是常見的有機溶劑，一般可以用來將蛋白雜質從DNA樣本里去除。基本原理是，有機溶劑會使雜質蛋白變性，并將雜質蛋白留在有機溶劑層，而DNA分子是有水溶性的，所以會進入水溶液層。這樣DNA和雜質蛋白就被分開了。這個方法的好處是便宜有效，特別是在提取基因組DNA時，要去掉許多從細胞裂解液中帶來的蛋白，苯酚法十分好用但苯酚和氯仿是有毒溶劑，而且有可能會...

RNA提取的注意事項

2023-10-10 RNA是目前發現細胞內生物功能豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道RNA提取的注意事項都有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、如何保存提取出的RNA？提取后溶解于RNase-freeWater中，RNA樣品建議立即進行下游實驗，如需儲存，建議分裝保存于-80℃。避免多次取用樣品，反復凍融。二、為什么提取的RNA有降解？1.使用的組織材料不新鮮。提取RNA應采用新鮮的組織材料，或將新鮮組織材料用液...

RNA提取的原理

2023-10-10 RNA提取是分子生物學中的一個重要步驟。那么你知道RNA提取的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！RNA提取是從細胞或組織中提取RNA的過程。RNA提取的目的是為了進一步分析RNA的組成、結構和功能，以便研究RNA在生物體內的作用和意義。RNA提取的基本原理是利用化學試劑將RNA從細胞或組織中分離出來，RNA的分離過程需要破壞細胞膜和核壁，使RNA從細胞中釋放出來。此外，還需要去除DNA、蛋白質等雜質，使提取到的RNA純度盡可能高。在普通PCR、QPCR、建庫測序等實驗，包括N...

你知道免疫組化實驗的分類與應用嗎？

2023-10-09 免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）是基于抗原抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色來對組織內抗原進行定位、定性、定量的一項技術。那么你知道免疫組化實驗的分類與應用嗎？讓我們一起來看看吧！一、分類根據抗體標記物的不同一般分為免疫酶標法、免疫熒光法、親和組織化學法、免疫鐵蛋白法、免疫金法、放射免疫自影法。下面介紹兩種較為常用的兩種技術：（1）免疫熒光法免疫熒光法是最早建立的免疫組織學技術。將已知抗體標上熒光素，以此作為探針，檢查細胞或組織內的...

免疫組化實驗流程有哪些？

2023-10-09 你知道免疫組化實驗流程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣品制備1.組織固定：根據要求收集人或動物的組織用于IHC分析，沖洗并用固定劑（一般用甲醛）進行固定2.組織包埋：將經甲醛固定的組織嵌入石蠟，以長期保持其天然形狀和組織結構3.切片安裝：將組織樣品在切片機上切片，并轉移至載玻片上干燥保持其形態4.脫蠟水化：因切片上的石蠟會妨礙染色，所以需將切片上的石蠟溶出，并水化。脫蠟或水化不全容易造成非特異性背景著色（一般的脫蠟水化步驟是：將切片依次浸入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10...

巨噬細胞的提取和分離方法是什么？

2023-10-09 巨噬細胞是機體免疫系統的重要細胞成分，具有抗感染、抗腫瘤和參與免疫應答、免疫調節等生物學功能。腹腔巨噬細胞多游離存在于腹水中易于獲得。因此，可以通過向小鼠腹腔內注射刺激物制造無菌炎癥環境以積聚巨噬細胞，來進行巨噬細胞研究。那么巨噬細胞的提取和分離方法是什么呢？讓我們一起來看看吧！一、材料小鼠，SPF級，體質量18～22g，雄性，6～8周齡。二、肉湯制備1.6%淀粉肉湯制備將1.0g胰蛋白胨、0.3g牛肉浸膏和0.5g氯化鈉放入盛有100mL雙蒸水的燒杯中，置于磁力攪拌器常溫溶...

免疫熒光實驗流程有哪些？

2023-10-09 免疫熒光是一種常用的光學顯微術，即用熒光顯微鏡來觀察細胞中的特定生物分子。免疫熒光依賴于抗體抗原的特異性結合，然后通過直接標記或間接標記方法使用熒光分子指征抗體-抗原結合的位置，以確定目標生物分子在細胞中的位置、豐度和分布情況。那么你知道免疫熒光實驗流程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.固定固定液種類：有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酮等）；交聯劑（4%PFA、10%中性福爾馬林），固定液的選擇取決于被研究抗原的性質及所用抗體的特性。但針對磷酸化的抗體，不適合用甲醛，會導致磷酸蛋白從...

如何區分細胞凋亡與壞死？

2023-10-09 細胞凋亡(Apoptosis)是生物界廣泛存在的一種現象，與其它的生命現象一樣具有同等重要的生理學或病理學意義。盡管其最終結果也是導致細胞死亡，但其誘導因素、發生機制和過程及意義均明顯不同于一般的病理性細胞死亡。那么我們該如何區分細胞的凋亡與壞死呢？讓我們一起來看看吧！細胞凋亡的形態特征與細胞壞死性死亡的形態特征不同。細胞壞死性死亡是被動的病理性死亡，其形態特征首先是膜通透性增加，細胞外型發生不規則變化，內質網擴張，核染色質不規則移位，進而線粒體及核腫張，溶酶體破壞，細胞膜破...