DNA轉染有何注意事項？

2023-10-08 轉染是生物學實驗中常用的實驗技術，那么你知道DNA轉染有何注意事項嗎？讓我們一起來看看吧！一、質粒DNA轉染注意事項1.啟動子的選擇啟動子的選擇對于轉染基因的有效表達是非常重要的。對于轉染過程本身雖然無甚影響，但是對轉染結果卻有著微妙的影響。2.質粒的大小和質量線性化還是超螺旋會影響轉染結果：超螺旋質粒的轉染效率比線性DNA高得多，特別是瞬時轉染。而線性化DNA轉染的整合幾率高。質粒太大了轉染會困難一些。畢竟，相對致密、較小的外源異物被細胞內吞的幾率要大一些。如果你的質粒正好...

原代細胞轉染的注意事項有哪些？

2023-10-08 你知道原代細胞轉染的注意事項有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.選擇合適的轉染試劑原代細胞對不同的轉染試劑有不同的敏感性和穩定性。因此，在選擇轉染試劑時，需要根據細胞類型和實驗需求進行篩選。2.優化細胞密度不同的原代細胞對細胞密度的要求不同，過低或過高的細胞密度可能會影響轉染效率。因此，在轉染前需要通過培養時間和培養條件等因素來優化細胞密度。3.使用合適的載體選擇合適的載體可以提高轉染效率和穩定性。常用的載體包括質粒、病毒和RNA。4.優化轉染條件優化轉染條件可以提高轉染效率和...

影響免疫組化（IHC）實驗結果的因素有哪些？

2023-10-08 免疫組化技術是利用已知的特異性抗體或抗原能特異性結合的特點，通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結合部位確定組織細胞結構的一門組化技術。那么影響免疫組化實驗結果的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、組織的固定組織固定的好壞直接影響免疫組化的結果，選擇良好的固定液并及時充分的固定可以防止組織自溶，最大限度保留組織的抗原性，保證免疫組化結果的準確性。常用固定液：10%的中性緩沖福爾馬林（40%甲醛10ml+0.01mol/LPBS...

影響免疫熒光（IF）實驗結果的因素有哪些？

2023-10-08 免疫熒光染色技術是一種以免疫學為基礎，結合生物化學技術和顯微技術發展而來的蛋白等分子檢測技術。那么你知道影響免疫熒光（IF）實驗結果的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、免疫熒光染色方法的選擇免疫熒光染色技術分為直接法和間接法。直接法：將熒光標記物偶聯在抗原/抗體上，直接與相應的抗體/抗原反應。間接法：先用未標記的一抗與抗原充分反應后，再利用熒光標記的二抗與已經結合在抗原上的一抗結合，達到檢測抗原的目的。優點缺點直接法操作簡單、特異性高，非特異性染色少便于相同宿主來源的不同...

影響ELISA結果的因素有哪些？

2023-10-08 ELISA酶聯免疫吸附試驗是目前臨床上zui常用的免疫學檢驗方法，由于其試劑穩定，易保存，操作簡便，結果判斷較客觀，既適宜于大規模篩查試驗，又可用于少量標本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析，目前已廣泛用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子檢測等領域。那么你知道影響ELISA結果的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣品樣品是檢測的前提，樣品質量會直接影響實驗結果。可以用ELISA來檢測的樣品很多，根據檢測項目不同可以是血清、血漿、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為...

RNA提取的注意事項有哪些？

2023-10-07 RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道RNA提取的注意事項都有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、如何保存提取出的RNA？提取后溶解于RNase-freeWater中，RNA樣品建議立即進行下游實驗，如需儲存，建議分裝保存于-80℃。避免多次取用樣品，反復凍融。二、為什么提取的RNA有降解？1.使用的組織材料不新鮮。提取RNA應采用新鮮的組織材料，或將新鮮組織材...

你知道PCR檢測技術的分類嗎？

2023-10-07 分子診斷技術是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學技術通過檢測基因的存在、缺陷或表達異常，從而對人體狀態和疾病作出診斷的技術。其基本原理是檢測DNA或RNA的結構是否變化、量的多少及表達功能是否異常，以確定受檢者有無基因水平的異常變化，對疾病的預防、預測、診斷、治療具有重要意義。那么你知道PCR檢測技術的分類嗎？讓我們一起來看看吧！PCR技術是一種用于擴增特定DNA片段的分子生物學技術，基本原理是在反應室中模擬細胞內的DNA復制，即人為創造核酸半保留復制條件，使目的DN...

內切酶實驗的注意事項有哪些？

2023-10-07 你知道內切酶實驗的注意事項有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、限制性內切酶一般反應條件當進行限制性酶切反應時，為確保最佳的反應條件，務必要遵守限制性內切酶供應商提供的建議。在此過程中需要考慮的重要參數包括：底物(DNA)和酶的量、反應體積以及孵育時間。根據傳統的定義，在最佳反應條件下，一個單位的限制性內切酶可以在1小時內，在50μL體系中wan全酶切1μL定義底物（例如，質粒pUC19）。盡管單位定義提供了一種測定方式，但還需注意，根據DNA底物之中的識別序列出現的頻率及所用底...