Wnt信號通路

2024-09-27 一、Wnt信號通路簡介Wnt在1982年shou次在小鼠胰腺癌中發現，由于此基因激活依賴小鼠乳腺癌相關病毒基因的插入，因此，當被命名為Int-1。之后的研究表明，Int1基因在小鼠正常胚胎發育中發揮重要作用，與果蠅的無翅（Wingless）基因功能相似，均可控制胚胎的軸向發育。此后大量研究提示Int1基因在神經系統胚胎發育中的重要性。因兩者基因與蛋白功能的相似性，研究者將Wingless與Int1合并，賦名為Wnt基因。人Wnt基因定位于12q13。在胚胎發育中，Wnt基因調...

ROS的檢測方法

2024-09-27 ROS在細胞生命，應激和死亡中具介導作用，今天讓我們來聊下ROS吧~一、ROS簡介活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）廣泛指代氧來源的自由基和非自由基，包含了超氧陰離子（O2-）、過氧化氫（H2O2）、羥自由基（OH-）、臭氧（O3）和單線態氧（1O2），由于它們含有不成對的電子，因而具有很高的化學反應活性。在機體內，ROS的主要來源之一是線粒體內膜的呼吸鏈底物端，在線粒體中的電子傳遞鏈復合物將電子傳遞給O2的過程中，有一部分O2被還原，形成O2-或H...

無血清培養基配方、使用方法

2024-09-26 一、前言細胞培養技術在生命科學研究領域是must的。在科研上，細胞培養基（medium）一般都會加入血清（Serum）來補充蛋白質（protein）、生長因子（growthfactor）或其他營養物質（nutrients）等，大部分細胞培養會選擇使用胎牛血清（fetalbovineserum,FBS）。近年來也陸續有多樣的血清種類，例如：人類血小板生長因子（platelet-richplasma,PRP）、小牛血清（bovinegrowthserum,BGS）等，中科百抗自研...

細胞培養的一般過程

2024-09-26 一、準備工作準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。二、取材在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的shou次培養稱為原代...

RNA酶保護試驗方法優缺點

2024-09-26 一、工作原理RNA酶保護法（RNaseProtectionAssay，RPA，以下簡稱RPA），是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。基本原理：將標記的特異RNA探針（32P或生物素）與待測的RNA樣品液相雜交，標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合，形成雙鏈RNA；未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特異RNA探針結合后形成雙鏈RNA，免受RNA酶的消化，故該方法命名為RNA酶保護實驗。二、RPA法優...

選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關重要

2024-09-26 新生牛血清是從出生0天至1周內或0至30天的新小牛中采集的血液制品，主要用于細胞培養和疫苗生產等生物制藥領域。在選購時應該關注血源的可追溯性、質量認證以及適用性；操作時應注意血清的采集、儲存條件和逐步適應訓練等。新生牛血清的選購指南：1.血源可追溯性：選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關重要。市面上存在較多以假亂真的產品，因此科研工作者需要對血清的真實產地、來源進行充分了解和鑒別。2.質量認證：通過嚴格的質量控制和多項性能測試。例如，某些特優級胎牛血清會有多達70項質量測試，...

生物制藥中殘留DNA檢測試劑盒推薦

2024-09-25 一、前言生物制藥是利用生物技術從組織、細胞等生物體中分離出有效成分后制備出的用于預防、治療和診斷的制品，如疫苗，重組蛋白藥等。目前，已開發出多種生產用的細胞系，如CHO細胞、大腸桿菌、VERO細胞等細胞系。然而這些通過大腸桿菌，CHO細胞等培養生產的生物制劑會含有宿主細胞殘留DNA等特定的雜質，殘留DNA會引發潛在的安全問題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或導致突變），所以相關的法律法規相繼出臺，以對生物制品中外源宿主DNA殘留量進行嚴格把控。如WHO和美國FDA現行...

大腸桿菌感受態細胞（E.coli DH5α）制備

2024-09-25 一、DH5αDH5α是大腸桿菌(Escherichiacoli)的一種感受態細胞系，通常被用于分子生物學實驗中。這些細胞被設計成對外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉化和質粒擴增等實驗中被廣泛使用。DH5α感受態細胞對于吸收外源DNA特別有效，這使得它們在基因工程和分子生物學研究中成為常見的實驗室工具。二、操作步驟1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養基中37℃搖床培養過夜（約16小時）；2、取1ml過夜培養物轉接于100mlLB培養基中，...