BCA法實驗原理、操作步驟

2024-09-25 一、實驗原理BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法，測定蛋白質即在堿性條件下蛋白質與Cu2+絡合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應，使其由原來的蘋果綠形成穩定的紫藍色復合物，在562nm有強烈的光吸收，且吸光值和蛋白質濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系，因此可用于蛋白質濃度測定。?二、操作步驟準備標準品和樣品?：將標準蛋白質溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀釋成一系列已知濃度的溶液，作為標準曲線。同時，將待測樣品適當稀釋，確保其在標準曲線的線性范圍內...

植物組織蛋白質提取方法

2024-09-25 方法一：1.根據樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據材料不同適當加入），準備提取液放在冰上。2.樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。3.用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4.提取上清夜，樣品制備完成。5.蛋白質提取液：300ml1Mtris-HCl（PH8）45ml甘油（Glycerol）75ml聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對SDS-PAGE，垂...

LNA在基因檢測中的應用

2024-09-24 一、LNA的介紹鎖核酸（Lockednucleicacid，LNA）是一種經過修飾的RNA，LNA中一部分核糖上的2'與4'碳連結在一起。一般可見于A-DNA或RNA。這類核酸可以增加引物或探針（probe）的融解溫度（Tm值），加強這些實驗用物質的穩定性，可應用在即時聚合酶連鎖反應（real-timePCR）等技術中。近期,鎖核酸(lockednucleicacid,LNA)作為一種新穎的核苷酸衍生物在藥學研究領域引起了人們的廣泛關注,有希望成為分子水平治療各種疾病的新突破...

?重組質粒發生逃逸的原因

2024-09-24 ?重組質粒發生逃逸的原因主要包括細胞分裂時不均勻分配、受體細胞的遺傳影響、外源基因過度表達、以及環境因素。?一、?重組質粒發生逃逸的原因一?細胞分裂時不均勻分配?：在細胞分裂過程中，重組質粒可能不均勻地分配到子代細胞中，導致一些子代細胞不含有重組質粒，從而發生逃逸。這種逃逸與質粒的拷貝數有關，低拷貝數質粒在分裂時更有可能導致子代細胞不含重組質粒?。二、?重組質粒發生逃逸的原因二?受體細胞的遺傳影響?：受體細胞的核酸酶可能將重組質粒視為外來DNA并進行降解，阻礙其獨立復制。此外...

重組蛋白產品正確溶解步驟

2024-09-24 一、重組蛋白重組蛋白（recombinantprotein）是指應用重組DNA或重組RNA技術而獲得的蛋白質。重組蛋白工程先應用基因克隆或化學合成技術獲得目的基因（geneofinterest，GOI），連接到適合的表達載體，導入到特定的宿主細胞，利用宿主細胞的遺傳系統，表達出有功能的蛋白質分子。重組蛋白的正確溶解步驟包括離心、溶解和（可能的話）進一步處理。二、重組蛋白溶解步驟一開蓋前離心試劑管。凍干粉在運輸過程中可能會因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上，所以在打開塑料瓶蓋前，...

WB實驗中單層貼壁總蛋白的提取方法

2024-09-24 一、前言蛋白質印跡法（WesternBlot）通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的分子生物學技術。WesternBlotting實驗單層貼壁細胞總蛋白的提取步驟：二、操作步驟1.倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。2.每瓶細胞加3ml4℃預冷的PBS（0.01MpH=7.2～7.3）。平放輕輕搖動1...

Wako BAMBANKER無血清細胞凍存液操作步驟

2024-09-23 一、細胞凍存細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。二、WakoBAMBANKER®無血清細胞凍存液簡介WakoBAMBANKER®無血清細胞凍存液是一款無血清、無動物源且成分明確的即用型細胞凍存液，適用幾乎所有類型細胞株。相比...

實驗室常用的幾種細胞核染料

2024-09-23 一、細胞核結構：細胞核的結構有核膜、核仁、染色質、核基質。主要功能是遺傳物質DNA儲存和復制的主要場所，是細胞遺傳和代謝的控制中心。①核膜：核膜是細胞核的外部邊界，由內外兩層單位膜組成，將細胞核與細胞質分隔開來。②核孔復合體：核孔復合體是核膜上的特殊結構，由多種蛋白質組成，形成環狀開口，允許大分子物質如mRNA、tRNA以及某些蛋白質在核質之間穿梭。③染色質：染色質是細胞核內的重要組成部分，由DNA和蛋白質組成，是遺傳信息的載體。④核仁：核仁是細胞核內的一個致密結構區域，與核...