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PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么？
2023-10-23
你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類(lèi)似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過(guò)程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過(guò)重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個(gè)過(guò)程通過(guò)控制反應(yīng)體系的溫度來(lái)實(shí)現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94...
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如何選擇免疫組化中的一抗？
2023-10-20
免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長(zhǎng)一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來(lái)做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱(chēng)為抗原決定簇，又稱(chēng)抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的抗體，就是...
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細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？
2023-10-20
你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞計(jì)數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5m...
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免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些？
2023-10-19
免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)靶抗原的技術(shù)。那么你知道免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞培養(yǎng)/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時(shí)間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進(jìn)一步降解，組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩(wěn)定在接近invivo狀態(tài)。二、通透處理通透即為對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行打孔處理，使抗體能進(jìn)入到細(xì)胞中和抗原發(fā)生結(jié)合。通...
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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？
2023-10-19
免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)是一種綜合定性、定位和定量；形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測(cè)技術(shù)。在原位檢測(cè)出病原的同時(shí)，還能觀察到組織病變與該病原的關(guān)系，確認(rèn)受染細(xì)胞類(lèi)型，從而有助于了解疾病的發(fā)病機(jī)理和病理過(guò)程。那么你知道免疫組化實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、石蠟切片再染色過(guò)程出現(xiàn)脫片現(xiàn)象1.烤片時(shí)間不夠，或溫度不夠，可以延長(zhǎng)烤片時(shí)間和提高烤片溫度；2.用含有多聚賴(lài)氨酸的玻片，可以購(gòu)買(mǎi)到或這自己做；3.有些組織本身就...
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二代測(cè)序（NGS）的原理
2023-10-18
DNA測(cè)序技術(shù)一直是分子生物學(xué)相關(guān)研究中常用的技術(shù)手段之一，從一定程度上推動(dòng)了該領(lǐng)域的快速發(fā)展。每一代測(cè)序技術(shù)的更替都標(biāo)志著生物學(xué)中基因芯片、數(shù)據(jù)分析、表面化學(xué)、生物工程等技術(shù)領(lǐng)域有了新的突破，使測(cè)序向著高通量、低成本、高安全性和商業(yè)化的方向發(fā)展。那么二代測(cè)序(NGS)的原理是什么？讓我們一起來(lái)看看吧！第二代測(cè)序(NGS)又稱(chēng)為高通量測(cè)序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來(lái)的DNA測(cè)序技術(shù)。二代測(cè)序引入了可逆終止末端，從而實(shí)現(xiàn)...
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支原體污染的檢測(cè)方法有哪些？
2023-10-18
支原體污染一般在顯微鏡下不可見(jiàn)，很難察覺(jué)，但細(xì)胞會(huì)受到極大的損傷，主要通過(guò)以下途徑影響細(xì)胞生長(zhǎng)及功能。那么支原體污染的檢測(cè)方法有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、分離培養(yǎng)法檢測(cè)方法：將待檢樣品接種到適合支原體生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中，如有支原體污染，液體培養(yǎng)基顏色會(huì)改變，固體培養(yǎng)基將會(huì)有菌落生長(zhǎng)。優(yōu)點(diǎn)：該方法被稱(chēng)為支原體培養(yǎng)法的金標(biāo)準(zhǔn)，可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體。缺點(diǎn)：支原體生長(zhǎng)到一定數(shù)量才能判斷是否有污染，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)支原體的快速檢測(cè)二、原位染色法檢測(cè)方法：通過(guò)染...
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細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦？
2023-10-18
支原體是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，支原體污染一般在顯微鏡下不可見(jiàn)，很難察覺(jué)，但細(xì)胞會(huì)受到極大的損傷，主要通過(guò)以下途徑影響細(xì)胞生長(zhǎng)及功能。那么細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、支原體污染的來(lái)源1.環(huán)境污染：如細(xì)胞培養(yǎng)房、細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)內(nèi)已被支原體污染；2.實(shí)驗(yàn)器材的污染：移液槍、移液管、細(xì)胞培養(yǎng)皿、水浴鍋等；3.細(xì)胞培養(yǎng)試劑的污染：培養(yǎng)基、胰酶、血清、細(xì)胞凍存液等；二、處理方法1.及時(shí)更換培養(yǎng)液：可以減緩支原體的污染，但不能wan全清除；2.使用...
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